肺癌中PTEN基因表达及其与凋亡的关系

【关键词】  小细胞肺癌；,,PTEN；,,凋亡；,,免疫组织化学技术；,,TUNEL,,,,

　　摘要：  目的： 探讨非小细胞肺癌组织中PTEN 的表达及临床意义与细胞凋亡的关系。方法： 72例肺癌组织(NSGLG和SCLC)、16例癌旁正常肺组织和7例肺良性病变组织PTEN 的表达采用免疫组织化学SP 法检测，34例SCLC 组织肿瘤细胞凋亡采用TUNEL法检测。结果：PTEN基因在肺癌组织中的阳性表达率为54.16%，显著低于肺良性病变组织的93.75% (P<0.01)。小细胞癌组织中的阳性率为31.8%，显著低于鳞癌组织(62.96%)和腺癌组织(50.00%) (P<0.05)。结论：PTEN基因的缺失与肺癌的发生与发展密切相关，并可能影响肿瘤的分化和癌细胞凋亡。

　　关键词：  小细胞肺癌；  PTEN；  凋亡；  免疫组织化学技术；  TUNEL   

　　PTEN基因是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，它在调控细胞生长及细胞凋亡过程中起着重要作用。PTEN 基因的失活与多种肿瘤的发生发展密切相关。本研究初步探讨PTEN 在肺癌发病机制中的作用及PTEN 蛋白的缺失与非小细胞肺癌癌细胞凋亡的关系。

　　1  材料和方法

　　11  材料

　　收集我院手术切除后并经病理证实72 例肺癌组织标本，术前均未接受化疗和放疗。其中男51例，女21例；年龄34 ～ 80岁，平均年龄58岁。根据WHO《肺肿瘤组织学分型》标准分类，其中鳞癌27 例，腺癌32 例。高分化11 例，中分化22 例，低分化26 例。小细胞癌症22例。另取16 例肺癌病灶旁肺组织及7 例肺良性病变组织作对照。所有组织均经10% 的中性甲醛固定，石蜡包埋，3 μm 厚石蜡切片。

　　12  免疫组织化学方法

　　PTEN为鼠抗人浓缩型单克隆抗体（1:100），PI3K为兔抗人浓缩型多克隆抗体（1:100），通用型SP试剂盒，均购自北京中山生物技术有限公司。采用SP法，DAB显色，苏木素复染，并镜检分析结果。空白对照用PBS取代一抗，其余步骤不变。

　　13  原位凋亡细胞检测

　　采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记法（ TUNEL），石蜡切片脱蜡水化、经组织处理液处理、蛋白酶K 消化、过氧化氢孵育、加平衡液和TdT 反应工作液、终止液终止反应后加过氧化物酶标记的抗地高辛抗体，DAB 显色、苏木精衬染，树脂封片。凋亡试剂盒购自Roche 公司和Intergen 公司。所有操作均按说明书进行。

　　14  结果判断标准PTEN

　　结果判断以细胞质中出现棕黄色且高于背景无特异染色为阳性细胞，计算阳性细胞百分率，< 10%为“ - ”，10% ～ 30%为“ + ”，30% ～ 70%为“ + + ”，70% ～ 100%为“ + + + ”。凋亡细胞结果判断以细胞核染成棕褐色为凋亡细胞，每一标本随机选取4 个400 倍视野，每一视野连续记数100 个癌细胞，计算癌细胞凋亡指数。

　　15  统计学分析方法

　　所有数据均用SPSS11.5软件包进行统计学分析，所得PTEN阳性表达率用卡方检验和Fisher检

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