激光共聚焦显微镜观察人胃癌细胞的粘附过程和整合素β1的表达

              作者：徐远义 黄允宁 马竟先

【摘要】  ［目的］ 探讨胃癌细胞粘附过程中的形态学变化以及与整合素β1表达的关系。［方法］ 借助位相差显微镜和激光共聚焦显微镜对胃癌MKN1活体细胞的粘附过程和整合素β1的表达部位和程度进行观察。［结果］ 细胞通过伸出伪足附着在培养盘上，整合素β1在细胞膜和细胞伪足部分的表达增强，并形成集落团块。［结论］ 人胃癌MKN1细胞的粘附过程和整合素β1的表达有直接关系。

【关键词】  胃肿瘤 粘附 整合素β1

    粘附是肿瘤细胞转移的一个基本过程。整合素是一个质膜糖蛋白的家族，由非共价结合的杂合二聚体组成，参与细胞—间质及细胞—细胞间粘附作用，包括胚胎发育、止血、血栓形成、创伤愈合、免疫性及非免疫性防御机制和致癌的转化作用等。整合素β1与肿瘤浸润有关。本实验使用共聚焦显微镜对胃癌MKN1细胞的粘附过程进行了观察，同时对整合素β1在粘附过程中的作用进行了研究。

    1   材料与方法

    1.1   主要材料

    人胃癌MKN1细胞株购自日本癌研究资源库。细胞保存在含有10%小牛血清(FBS)的RPMI?鄄1640培养液中，在37℃，5%CO2的条件下培养。使用FITC标记的抗整合素β1抗体。

    1.2   方   法

    位相差显微镜观察：将MKN1细胞(5×104细胞/孔) 培养于4孔培养盘中30min后用位相差显微镜观察细胞的形态。

    细胞整合素β1的荧光免疫染色：将MKN1细胞培养于含有FITC标记的抗整合素β1抗体（1/50）的0.2% 牛血清蛋白（BSA）/PBA中90min。用PBS洗3次后，将细胞置于共聚焦显微镜观察盒中，用含有10%FBS的培养液培养,在37℃，5%CO2条件下进行观察（激发波长488nm，发射波长515nm）。

    2   结   果

    2.1   胃癌MKN1细胞形态变化

    胃癌MKN1细胞是贴壁生长细胞，在置入培养盘后很快附着在培养盘壁上，并粘附于培养盘上。细胞首先发生形态变化，由圆形变成椭圆形，同时伸出伪足与培养盘壁相接，使细胞稳定地粘附于培养盘壁上。细胞继续伸展成扁平状，并通过伪足与其它细胞接触形成单细胞层，这种结构可以使细胞稳定附着于培养盘上。培养30mim后位相差显微镜下即可观察到细胞与培养盘粘附；4h后可观察到细胞伸展呈扁平状，表面形成伪足，细胞伪足间相互连接，使细胞稳定附着于培养盘上。

    2.2  

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