活血补肾合剂对C57BL/6小鼠皮肤血管新生及毛囊中血管内皮细胞生长因子表达的影响

【摘要】  通过观察C57BL/6小鼠皮肤局部血管新生及毛囊中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）的表达，探讨活血补肾合剂促进小鼠毛发生长的可能机制。方法:以热松香和石蜡混合物脱毛法诱导C57BL/6小鼠休止期毛囊进入生长期，建立动物模型。90只小鼠随机分为活血补肾合剂组、养血生发胶囊组和模型组。造模后第1天起开始灌药，每天观察各组小鼠皮肤毛发生长情况，并分别于造模后第4、11、17天每组分批处死10只小鼠，病理切片计数拔毛部位的血管数，并以免疫组织化学方法检测毛囊中VEGF表达情况。结果:活血补肾合剂组局部新生血管数第4天时多于模型组（ P <0.05），第11天时明显多于养血生发胶囊组和模型组（ P <0.05）;活血补肾合剂组毛囊中VEGF的表达在第11天和第17天时均明显高于养血生发胶囊组和模型组（ P <0.05）。结论:活血补肾合剂可能是通过调节细胞因子水平，起到促进血管新生和毛发生长的作用。

【关键词】  中医药; 血管; 血管内皮细胞生长因子; 免疫组织化学; 毛囊; 小鼠

　活血补肾合剂（Huoxue Bushen Mixture， HXBSM） 是龙华医院皮肤科经验方，临床治疗脱发取得了良好的疗效［1］。本实验观察活血补肾合剂对小鼠毛发生长、局部血管新生及毛囊中血管内皮细胞生长因子 （vascular endothelial growth factor， VEGF）表达的影响，旨在从微观结构和细胞因子水平对活血补肾合剂促进毛发生长作用的机制加以阐释。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验材料

　　1.1.1 动物 C57BL/6小鼠，普通级，8周龄，体质量（20±2）g，雄性，由上海中医药大学实验动物中心提供。

　　1.1.2 药物来源与制剂加工 活血补肾合剂由地黄30 g、丹参40 g、益母草20 g、玄参15 g、黄芪 40 g 、党参20 g、麦冬15 g、猪苓20 g、金钱草40 g、白花蛇舌草40 g共10味中药组成，由龙华医院制剂室制备（沪药制字z05170520），含生药4 g/ml。养血生发胶囊（熟地黄、当归、羌活、木瓜、制何首乌等）由广州敬修堂药业股份有限公司生产，批号030263。生理盐水，上海市富民制药厂生产。

　　1.2 造模、分组及药物处理

　　1.2.1 动物模型建立 参考文献［2］建立动物模型，将按1∶1的比例混合的松香和石蜡加热融化后涂于C57BL/6小鼠背部，凝固变硬后揭去，从而达到脱毛的效果。每只小鼠脱毛区域约为2 cm×2 cm。

　　1.2.2 动物分组及药物处理 按《药理与中药药理实验》［3］人鼠等效剂量换算方法计算各种药物的人鼠等效剂量。C57BL/6小鼠，共90只，随机分为 3组 ，每组30只。活血补肾合剂组，以生药 25 g/（kg·d） 剂量灌饲;养血生发胶囊（Yangxue Shengfa Capsule， YXSFC）组，以0.36 g/（kg·d）剂量灌饲; 模型组，生理盐水0.4 ml/d灌胃。以上 3组 每天灌服药物1次，从造模后第1天起，连续给药17 d。

　　1.3 检测指标与方法

　　1.3.1 肉眼观察 各组小鼠拔毛局部皮色变化及毛发生长情况。

　　1.3.2 光学显微镜下观察 分别于造模后第4、 11天 用断颈法每组随机

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